Resep Media Murashige & Skoog (MS)

Bahan :

     a. Unsur hara makro :

          - KNO₃                          = 1.900 mg

          - NH₄NO₃                      = 1.650 mg

          - CaCl₂.2H₂O                 = 440 mg

          - MgSO₄.7H₂O               = 370 mg

          - KH₂PO₄                       = 170 mg

     b.  Unsur hara mikro :

          - MnSO₄.4H₂O              = 2230 mg

          - ZnSO₄.7H₂O               = 860 mg

          - H₃BO₃                         = 620 mg

          - KI                                = 83 mg

          - Na₂MoO₄.2 H₂O         = 25 mg

          - CuSO₄.5H₂O               = 2,5 mg

          - CoCl_2.6H₂O                 = 2,5 mg

     c.  Besi :

          - FeSO₄.7H₂O               = 1112 mg

          - Na₂-EDTA.2H₂O        = 1492 mg

     d.  Vitamin :

          - Thiamin HCl                  = 5 mg

          - Asam nikotinat               = 25 mg

          - Piridoksin HCl               = 25 mg

          - Glisin                             = 100 mg

 e.  Hormon :

          - Sitokinin                        = 100 mg

- Auksin                           = 100 mg

 f.  Bahan pemadat :

          - agar                            = 7 g/l

 g.  Sukrosa                        = 30 g/l

 h.  KOH atau NaOH         = 1 M     

 i.   HCl                              = 1 M

1. Pembuatan larutan stok

a.  Larutan stok A, merupakan larutan unsur hara makronutirent 500ml (100 kali konsentrasi).

-    Masukkan bahan-bahan kimia yang telah ditimbang satu persatu ke dalam Elenmeyer 500 ml yang telah berisi aquadest steril 300ml. Setiap kali memasukkan bahan kimia harus segera diaduk/dilarutkan. Setelah larut, bahan kimia berikutnya dimasukkan.

     Cara memasukkan sepeti ini seperti ini untuk mengindari adanya endapan. Pengadukan dapat dilakukan dengan cara menggunakan pengaduk magnetik.

-    Setelah semua bahan kimia masuk, dan larut, tambahkan aquadest sampai volume larutan menjadi 500 ml.

-    Tutup gelas Erlenmeyer yang berisi larutan mikronutrient

-  Beri label : MIKRO , MS 100x 5 ml/l

     Artinya untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 5 ml larutan mikronutient stok

b.  Larutan stok B, merupakan larutan hara mikronutrient

     Larutkan bahan bahan yang telah ditimbang satu persatu ke dalam Erlenmeyer 250ml yang telah diisi dengan 150 ml aquadest. Gojok Erlenmeyer setiap kali penambahan bahan kimia sampai larut. Setelah semua bahan kimia masuk dan larut, tambahkan aquadest sampai volume larutan menjadi 200ml. Untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 10 ml stok makro.

c.  Larutan stok C, merupakan larutan stok Iron (besi) 200ml (40 kali konsentrasi)

-  Melarutkan masing-masing bahan FeSO₄.7H₂O dan Na₂-EDTA.2H₂O pada Erlenmeyer 200ml yang terpisah, masing-masing berisi 75 ml

-  Jika bahan-bahan tersebut sukar larut, tambahkan beberapa HCl, lalu panaskan

-  Setelah larut, campur kedua macam laruta bahan tersebut ke dalam satu Erlenmeyer

-  Biarkan dingin pada suhu kamar

-  Tambahkan aquadest sampai volume menjadi 200ml

-  Tutup rapat

-  Beri label : IRON, MS 40x, 5 ml/l

Artinya : untuk membuat 1liter medium MS, diperlukan 5 ml stok

d.  Larutan stok D, merupakan larutan vitamin 200ml (50 kali konsentrasi)

-  Masukkan bahan-bahan Thiamin HCl, Asam nikotinat ,Piridoksin HCL, Glisin satu persatu ke dalam Erlenmeyer 200ml yang telah berisi aquadest steril 150 ml. Setiap kali memasukkan bahan, dilarutkan dengan menggunakan pengaduk kemuadia dimasukkan ahan berikutnya

-  Setelah semua bahan masuk, tambahkan aquadest sampai volume seluruhnya 200ml

-  Tutup rapat Erlnmeyer yang berisi larutan vitamin stok

-  Beri label : VITAMIN, MS 50x 4ml/l

Artinya untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 4 ml stok

- Simpan dalam lemari es

f.  Larutan Stok F, merupakan larutan stok hormon : 100ml (1000ppm)

-  Menuangkan hormon yang sudah ditimbang ke dalam gelas Erlenmeyer 100 ml yang berisi aquadest kira-kira 70m

-  Sambil di aduk-aduk teteskan sedikit larutan KOH 1 N dengan hati-hati sampai tampak larut (tampak jernih)

-  Pindahkan ke dalam gelas ukur 100ml, tambahkan aquadest sampai 100ml

-  Pindahkan ke dalam gelas Erlenmeyer 100ml

-  Tutup rapat

-  Beri label

2. Pembuatan Medium Kultur

a.  Aquades sebanyak 500 ml disiapkan di dalam erlenmeyer berukuran 1000 ml. Untuk pembuatan 1 liter medium, ditambahkan stok A 100 ml, stok B 5 ml, stok C 50 ml, stok D 50 ml, stok E 2 ml dan stok F : IAA (air kelapa) 15 ml.

b.  Sukrosa ditimbang sebanyak 30 gram dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer sambil diaduk.

c.  Aquades ditambahkan samapai volumenya 1000 ml.

d.  pH larutan diukur menggunakan pH meter elektrik hingga mencapai pH yang dibutuhkan yaitu 5,7 – 5,8. Jika terlalu asam tambahkan NaOH atau KOH 1 M, dan jika terlalu basa tambahkan HCl 1 M.

e. Sebanyak 7 gram agar-agar ditambahkan ke dalam larutan, lalu dpanaskan sampai mendidih sambil diaduk-aduk.

f.  Medium dituangkan ke dalam botol sekitar 20 ml.

g.  Botol ditutup menggunakan aluminium foil dan seal.

3. Sterilisasi Media

a.  Botol kultur yang sudah berisi medium dimasukkan ke dalam autoclave dengan tekanan 15 - 17,5 psi pada suhu 120 ^oC selama 20 menit, sampai tiga kali.

b.  Botol diangkat dan disimpan dalam ruang inkubasi sampai siap digunakan.

c.  Medium siap digunakan.